人膀胱癌阿霉素耐藥株所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。收到細胞后,在倒置鏡下觀察整個細胞生長情況。
人膀胱癌阿霉素耐藥株的傳代其操作步驟如下(斜面接種法):
?。?)從冰箱冷藏室中取出菌種斜面后,應在室溫放置約30分鐘。
?。?)將裝有新鮮配制的培養基菌種保藏管管壁上注明菌名及接種日期,和傳代菌種一并移入潔凈工作臺,打開紫外燈照射一小時。
(3)關閉紫外燈。點燃酒精燈,左手握住人膀胱癌阿霉素耐藥株斜面,將管口靠近火焰上方,右手拿接種棒后端,將接種環燒紅約30秒,隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼,往返通過三次。
(4)右手用無名指、小指及掌部夾住管塞,左手將管口在火焰上旋轉燒灼,右手再輕輕拔開管塞,將接種環伸入管內先在近壁的瓊脂斜面上靠一下,稍冷后再至菌苔上,刮取少量菌苔,隨即取出接種棒并將菌種管口移至火焰上方。
(5)塞上管塞,左手將人膀胱癌阿霉素耐藥株放下,取營養瓊脂斜面一支,照上述操作打開管塞,將接種環伸入管內至瓊脂斜面的底部向上劃一條直線,然后從底部向上作連續曲線劃線,一直劃到斜面頂端,使細菌接種在斜面的表面上。
?。?)取出接種環,在火焰上方將培養基管蓋上塞子,然后將接種過細菌的接種環在火焰上燒灼滅菌。
?。?)將已接種好的細菌管置30~35℃細菌培養箱培養22~24h,真菌管置23~28℃真菌培養箱zui多培養7天。
當工作用人膀胱癌阿霉素耐藥株傳代代數小于5時,可直接用上一代工作用菌種轉接下一代工作用菌種,如:(W3)可直接轉接為(W4)。按上述程序操作,直至(W4)轉為(W5)為止,需重新接種,舊的工作菌種進行銷毀。